新疆农业科学

2019, v.56(02) 226-232

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棉花GhPAO3基因的CRISPR/Cas9表达载体的构建
Construction of CRISPR/Cas9 Expression Vector of GhPAO3 Gene in Cotton

朱雪峰;田文刚;熊显鹏;薛飞;张莉;朱华国;

摘要(Abstract):

【目的】研究棉花GhPAO3基因的功能,通过CRISPR/Cas9技术构建棉花GhPAO3基因的基因编辑载体。【方法】筛选合适的两个PAM位点设计引物,在引物中添加接头,重叠延伸PCR,将两个靶标片段连接在一起。通过限制性核酸内切酶BsaⅠ对pRGEB32-7载体进行单酶切,使用一步法连接重叠延伸产物与线性化的pRGEB32-7载体。【结果】使用电击转化法将构建好的棉花GhPAO3基因的基因编辑载体转入农杆菌LBA4404感受态,通过卡那霉素筛选阳性单克隆菌株。【结论】条带大小与预期一致,棉花GhPAO3基因的基因编辑载体构建成功。

关键词(KeyWords): 棉花;CRISPR/Cas9;基因编辑;GhPAO3

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家自然科学基金(31660427);; 兵团现代农业科技成果转化计划(2015AC007)~~

作者(Author): 朱雪峰;田文刚;熊显鹏;薛飞;张莉;朱华国;

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